Biopolymers and cell. 2010; 26 (6): 492 - 498
Разработка стратегии получения рекомбинантных одноцепочечных антител против поверхностных клеточных биомаркеров на примере антигена CD34 человека
Ю. С. Николаев, О. Б. Горбатюк1, М. В. Цапенко
ГУ «Институт генетической и регенеративной медицины АМН Украины», Ул. Вышгородская, 67, Киев, Украина, 04114
1Киевский национальный университет имени Тараса Шевченко, Ул. Владимирская, 60, Киев, Украина, 01033
Антитела против поверхностных клеточных белков выполняют важную функцию в процедурах детектирования, определения стадии дифференциации и выделения целевых популяций клеток. Поверхностные клеточные антигены часто имеют сложную структуру внеклеточного участка молекулы, характеризующуюся сильным гликозилированием и стабилизированную дисульфидными связями. При этом получение антител против таких белков является нетривиальной задачей. Цель. Разработать стратегию получения рекомбинантных антител против поверхностных клеточных биомаркеров. Методы. Конструирование библиотеки кДНК генов VH и VL иммуноглобулинов животных, иммунизированных рекомбинантным антигеном, и использование биопеннинга на антиген-позитивных клетках для обогащения исходной библиотеки последовательностями целевых антител. Детектирование и отбор клонов – продуцентов целевых антител осуществляли с помощью высокопродуктивных автоматизированных систем. Результаты. Получена панель из пяти антител, распознающих антиген на поверхности CD34-позитивных клеток. Выводы. Предложенная стратегия может быть использована для получения антител против поверхностных клеточных антигенов.
Ключевые слова: CD34, фаговый дисплей, рекомбинантные одноцепочечные антитела (ScFv), биопеннинг.