Іммобілізовані одноланцюгові антитіла для афінного очищення рекомбінантного інтерферону α2b людини
DOI:
https://doi.org/10.7124/bc.00072BКлючові слова:
одноланцюгові антитіла, імуноафінна хроматографія, іммобілізація білка, злитий білокАнотація
Представлено лабораторний метод отримання афінного імуносорбенту для хроматографічного очищення білків, який полягає в орієнтованій і нековалентній іммобілізації рекомбінантних фрагментів антитіл на целюлозному носії. На основі ДНК-послідовностей одноланцюгових антитіл (ScFv) до інтерферону IFN-α2b людини і целюлозозв'язувального домену (CBD) із целюлозолітичного комплексу Clostridium thermocellum сконструйовано злитий білок (ScFv-CBD). Після експресії гена ScFv-CBD в Escherichia coli і виділення цільового білка у функціонально активній формі здійснено його пряму іммобілізацію на мікрогранулярній целюлозі Целюлозу з іммобілізованим ScFv-CBD використано як афінний сорбент для очищення рекомбінантного IFN-α2b людини.Посилання
Moroney S, Pluckhun A. Modern antibody technology: The impact on drug development. Modern Biopharmaceuticals. Weinheim: Wiley VCH, 2005. Vol. 4: 1147-1186.
Holliger P, Hudson PJ. Engineered antibody fragments and the rise of single domains. Nat Biotechnol. 2005;23(9):1126-36.
Huston JS, Levinson D, Mudgett-Hunter M, Tai MS, Novotn? J, Margolies MN, Ridge RJ, Bruccoleri RE, Haber E, Crea R, et al. Protein engineering of antibody binding sites: recovery of specific activity in an anti-digoxin single-chain Fv analogue produced in Escherichia coli. Proc Natl Acad Sci U S A. 1988;85(16):5879-83.
Pluckthun A, Krebber A, Krebber C, Horn U, Knupfer U, Wenderoth R, Nieba L, Proba K, Riesenberg D. Producing antibodies in Escherichia coli: from PCR to fermentation. Antibody engineering. Eds J. McCafferty, H. R. Hoogen- boom. Oxford: IRL press, 1996: 203-252.
Berry MJ, Davies J, Smith CG, Smith I. Immobilization of Fv antibody fragments on porous silica and their utility in affinity chromatography. J Chromatogr. 1991;587(2):161-9.
Arnold-Schild D, Kleist C, Welschof M, Opelz G, Rammensee HG, Schild H, Terness P. One-step single-chain Fv recombinant antibody-based purification of gp96 for vaccine development. Cancer Res. 2000;60(15):4175-8.
Berdichevsky Y, Lamed R, Frenkel D, Gophna U, Bayer EA, Yaron S, Shoham Y, Benhar I. Matrix-assisted refolding of single-chain Fv- cellulose binding domain fusion proteins. Protein Expr Purif. 1999;17(2):249-59.
Blank K, Lindner P, Diefenbach B, Pl?ckthun A. Self-immobilizing recombinant antibody fragments for immunoaffinity chromatography: generic, parallel, and scalable protein purification. Protein Expr Purif. 2002;24(2):313-22. PubMed
Okunev OV, Gil'chuk PV, Irodov DM, Deriabina EG. Production and characterization of the single chain antibodies against human alpha2b-interferon. Ukr Biokhim Zh. 2005;77(5):106-15.
Recombinant protein handbook: Protein amplification and simple purification. Amersham Parmacia Biotech. 1996 (18-1142-75):108.
Sinacola JR, Robinson AS. Rapid refolding and polishing of single-chain antibodies from Escherichia coli inclusion bodies. Protein Expr Purif. 2002;26(2):301-8.
Morag E, Lapidot A, Govorko D, Lamed R, Wilchek M, Bayer EA, Shoham Y. Expression, purification, and characterization of the cellulose-binding domain of the scaffoldin subunit from the cellulosome of Clostridium thermocellum. Appl Environ Microbiol. 1995;61(5):1980-6.
