Отримання і характеристика моноклональных антитіл проти еукаріотичного трансляційного фактора елонгації 1А
DOI:
https://doi.org/10.7124/bc.000654Анотація
Еукаріотичний фактор елонгації трансляції 1A (eEF1A) – один з основних компонентів трансляційного апарату клітини, виконує цілу низку неканонічних функцій, не пов'язаних з процесом трансляції. У представленій роботі фактор елонгації 1А з печінки курки очищено практично до гомогенності за допомогою послідовних хроматографій на різних носіях. Очищений білок використано для отримання моноклональних антитіл проти eEF1A, які є видонеспецифічними і розпізнають цей білок в імуноферментному аналізі та імуноблотингу, а також при імуногістологічних дослідженнях тканин людини. Моноклональні антитіла взаємодіяли як з першою, так і з другою ізоформою eEF1A. Отримані антитіла буде використано для вивчення канонічних і неканонічних функцій eEF1A, зокрема, для з'ясування можливої ролі цього білка в онкогенезі.Посилання
Negrutskii BS, El’skaya AV. Eukaryotic Translation Elongation Factor 1?: Structure, Expression, Functions, and Possible Role in Aminoacyl-tRNA Channeling. Progress in Nucleic Acid Research and Molecular Biology. 1998;47–78.
Lee S, Wolfraim LA, Wang E. Differential expression of S1 and elongation factor-1 alpha during rat development. J Biol Chem. 1993;268(32):24453-9.
Lee S, LeBlanc A, Duttaroy A, Wang E. Terminal differentiation-dependent alteration in the expression of translation elongation factor-1 alpha and its sister gene, S1, in neurons. Exp Cell Res. 1995;219(2):589-97.
Knudsen SM, Frydenberg J, Clark BF, Leffers H. Tissue-dependent variation in the expression of elongation factor-1 alpha isoforms: isolation and characterisation of a cDNA encoding a novel variant of human elongation-factor 1 alpha. Eur J Biochem. 1993;215(3):549-54.
Cavallius J, Rattan SI, Clark BF. Changes in activity and amount of active elongation factor 1 alpha in aging and immortal human fibroblast cultures. Exp Gerontol. 1986;21(3):149-57.
Talapatra S, Wagner JD, Thompson CB. Elongation factor-1 alpha is a selective regulator of growth factor withdrawal and ER stress-induced apoptosis. Cell Death Differ. 2002;9(8):856-61.
Ohta K, Toriyama M, Miyazaki M, Murofushi H, Hosoda S, Endo S, Sakai H. The mitotic apparatus-associated 51-kDa protein from sea urchin eggs is a GTP-binding protein and is immunologically related to yeast polypeptide elongation factor 1 alpha. J Biol Chem. 1990;265(6):3240-7.
Tatsuka M, Katayama H, Ota T, Tanaka T, Odashima S, Suzuki F, Terada Y. Multinuclearity and increased ploidy caused by overexpression of the aurora- and Ipl1-like midbody-associated protein mitotic kinase in human cancer cells. Cancer Res. 1998;58(21):4811-6.
Wu-Baer F, Lane WS, Gaynor RB. Identification of a group of cellular cofactors that stimulate the binding of RNA polymerase II and TRP-185 to human immunodeficiency virus 1 TAR RNA. J Biol Chem. 1996;271(8):4201-8.
Durso NA, Cyr RJ. A calmodulin-sensitive interaction between microtubules and a higher plant homolog of elongation factor-1 alpha. Plant Cell. 1994;6(6):893-905.
Yang W, Boss WF. Regulation of phosphatidylinositol 4-kinase by the protein activator PIK-A49. Activation requires phosphorylation of PIK-A49. J Biol Chem. 1994;269(5):3852-7.
Grant AG, Flomen RM, Tizard ML, Grant DA. Differential screening of a human pancreatic adenocarcinoma lambda gt11 expression library has identified increased transcription of elongation factor EF-1 alpha in tumour cells. Int J Cancer. 1992;50(5):740-5.
Anand N, Murthy S, Amann G, Wernick M, Porter LA, Cukier IH, Collins C, Gray JW, Diebold J, Demetrick DJ, Lee JM. Protein elongation factor EEF1A2 is a putative oncogene in ovarian cancer. Nat Genet. 2002;31(3):301-5.
Su Z, Goldstein NI, Fisher PB. Antisense inhibition of the PTI-1 oncogene reverses cancer phenotypes. Proc Natl Acad Sci U S A. 1998;95(4):1764-9.
Kaziro Y. The role of guanosine 5'-triphosphate in polypeptide chain elongation. Biochim Biophys Acta. 1978;505(1):95-127.
Bradford MM. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal Biochem. 1976;72:248-54.
Kristensen P, Lund A, Clark BF, Cavallius J, Merrick WC. Purification and characterisation of a tissue specific elongation factor 1 alpha (EF-1 alpha 2) from rabbit muscle. Biochem Biophys Res Commun. 1998;245(3):810-4.
Kinzy TG, Merrick WC. Characterization of a limited trypsin digestion form of eukaryotic elongation factor 1 alpha. J Biol Chem. 1991;266(7):4099-105.
Laemmli UK. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970;227(5259):680-5.
Filonenko VV, Wolfson AD, Wartanyan OA, Beresten SF. Monoclonal antibodies to the components of the high-molecular-mass aminoacyl-tRNA synthetase complex. Biomed Sci. 1991;2(3):289-92.
Lorette C. J. Immunocytochemical methods and protocols. Ed. C. J. Lorette. Tokyo: Humana press, 1999:233 p.
Shalak VF, Budkevich TV, Negrutski? BS, El'skaia AV. A fast and effective method for purification of elongation factor 1 alpha from rabbit liver. Ukr Biokhim Zh. 1997;69(2):104-9.
Davydova EK, Sitikov AS, Ovchinnikov LP. Phosphorylation of elongation factor 1 in polyribosome fraction of rabbit reticulocytes. FEBS Lett. 1984;176(2):401-5.
Dever TE, Costello CE, Owens CL, Rosenberry TL, Merrick WC. Location of seven post-translational modifications in rabbit elongation factor 1 alpha including dimethyllysine, trimethyllysine, and glycerylphosphorylethanolamine. J Biol Chem. 1989;264(34):20518-25.
Tisdale EJ, Tartakoff AM. Extensive labeling with [3H]ethanolamine of a hydrophilic protein of animal cells. J Biol Chem. 1988;263(17):8244-52.
Venema RC, Peters HI, Traugh JA. Phosphorylation of elongation factor 1 (EF-1) and valyl-tRNA synthetase by protein kinase C and stimulation of EF-1 activity. J Biol Chem. 1991;266(19):12574-80.
