Biopolym. Cell. 2020; 36(1):3-12.
Структура и функции биополимеров
Лектин коры бересклета европейского (Euonymus europaeus L.): очистка, физико-химические характеристики и использование в гистохимических исследованиях
1Врубель О. Р., 1Согомонян Е. А., 1, 2Антонюк В. А.
  1. Львовький национальный медицинский университет имени Даниила Галицкого
    ул. Пекарьска, 69, Львов, Украина, 79010
  2. Институт биологии клетки НАН Украины
    ул. Драгоманова, 14/16, Львов, Украина, 79005

Abstract

Цель. Очистка лектинов из коры и семян E. europaeus L. и сравнительная характеристика их углеводной и гистохимической специфичности. Оценка целесообразности замены лектина семян лектином коры E. europaeus L. Методы. Высаливание лектинов NaCl, ионообменная хроматография на ДЭАЭ-Toyopearl и аффинная хроматография на поперечно-сшитом овомуцине, исследования елекрофоретической чистоты в ПААГ, сравнительное исследование иммунохимических и гистохимических свойств лектинов коры и семян. Результаты. В коре бересклета европейского найдено лектин, который по углеводной специфичностью не отличается от лектина семян. Разработан способ очистки этого лектина путем высаливания NaCl; ионообменной хроматографии на ДЭАЭ-Toyopearl и аффинной хроматографии на поперечно-сшитом овомуцине с помощью элюции боратный буферным раствором (рН 9,0 - 9,8) в диапазоне температур +30 - + 55оС. У лектина исследована электрофоретическая чистота и осуществлено сравнительное исследование иммунохимических свойств лектинов коры и семян бересклета европейского. Гистохимическое исследование связывания лектинов коры и семян бересклета европейского с гликоконьюгатами тканей млекопитающих показало, что оба лектина связываются с одними и теми же гистологическими структурами. Однако лектин коры имеет преимущество над лектином семян в более простом способе очистки (отсутствие процедуры обезжиривания семян) и в возможности заготовки сырья в течение целого года. Также исследована динамика изменений гемагглютинирующей активности лектинов в органах бересклета европейского течение годового вегетационного цикла растения, что позволило выбрать оптимальные сроки заготовки сырья для очистки этого лектина.
Keywords: Бересклет европейский, Euonymus europaeus L., лектины, углеводная специфичность, очистка, свойства

References

[1] Fouquaert E, Peumans WJ, Smith DF, Proost P, Savvides SN, Van Damme EJ. The "old" Euonymus europaeus agglutinin represents a novel family of ubiquitous plant proteins. Plant Physiol. 2008;147(3):1316-24.
[2] Petryniak J, Pereira ME, Kabat EA. The lectin of Euonymus europeus: purification, characterization, and an immunochemical study of its combining site. Arch Biochem Biophys. 1977;178(1):118-34.
[3] Fouquaert E, Van Damme EJ. Promiscuity of the euonymus carbohydrate-binding domain. Biomolecules. 2012;2(4):415-34.
[4] Agostino M, Velkov T, Dingjan T, Williams SJ, Yuriev E, Ramsland PA. The carbohydrate-binding promiscuity of Euonymus europaeus lectin is predicted to involve a single binding site. Glycobiology. 2015;25(1):101-14.
[5] Shangguan W, Fan C, Chen X, Lu R, Liu Y, Li Y, Shang Y, Yin D, Zhang S, Huang Q, Li X, Meng W, Xu H, Zhou Z, Hu J, Mo X. Endothelium originated from colorectal cancer stem cells constitute cancer blood vessels. Cancer Sci. 2017;108(7):1357-1367.
[6] Toyoda M, Yamazaki-Inoue M, Itakura Y, Kuno A, Ogawa T, Yamada M, Akutsu H, Takahashi Y, Kanzaki S, Narimatsu H, Hirabayashi J, Umezawa A. Lectin microarray analysis of pluripotent and multipotent stem cells. Genes Cells. 2011;16(1):1-11.
[7] Wang S, Fan Z, Zhou B, Wang Y, Du P, Tan W, Lammi MJ, Guo X. Roles of Glycoproteins in the Diagnosis and Differential Diagnosis of Chronic and Latent Keshan Disease. Molecules. 2017;22(5). pii: E746.
[8] Antonyuk VA. Lectins and their raw materials sources. Lviv: “Quart”, 2005; 554 P.
[9] Antonyuk VA A.S. USSR No. 1554961, A method of obtaining an affinity sorbent for purification of lectins IPC B 01 J 20/22, C 12 N 11/00, publ. 04.07.90 BI No. 13, 1990.
[10] Maurer G. Disk-Electrophoresis. Moscow. “Mir”, 1971; 55–102.
[11] Lutsik AD, Detjuk ES, Lutsik MD. Lectins in Histochemistry. Lviv: “Lviv University edition”. 1989; 144 p.
[12] Van den Bergh KP, Rougé P, Proost P, Coosemans J, Krouglova T, Engelborghs Y, Peumans WJ, Van Damme EJ. Synergistic antifungal activity of two chitin-binding proteins from spindle tree (Euonymus europaeus L.). Planta. 2004;219(2):221-32.
[13] Wheatley RM, Poole PS. Mechanisms of bacterial attachment to roots. FEMS Microbiol Rev. 2018;42(4):448-461.
[14] Lannoo N, Van Damme EJ. Lectin domains at the frontiers of plant defense. Front Plant Sci. 2014;5:397.