Biopolym. Cell. 2009; 25(5):424-427.
Краткие сообщения
Интерсектин 1 и Ruk/CIN85 колокализуются в клатрин-окаймленных ямках клеток линии MCF-7
1Николаенко А. В., 1Скрипкина И. Я., 1Цыба Л. А., 2Дробот Л. Б., 1Рындич А. В.
  1. Институт молекулярной биологии и генетики НАН Украины
    ул. Академика Заболотного, 150, Киев, Украина, 03680
  2. Институт биохимии имени А. В. Палладина НАН Украины
    ул. Леонтовича, 9, Киев, Украина, 01601

Abstract

Активация рецепторних тирозин киназ соответствующими лигандами приводит не только к распространению сигнала, но и инициирует разные процессы, например, клатрин-опосредованный эндоцитоз, которые регулируют клеточный ответ. Эти процессы строго контролируются благодаря координированному действию большого количества белков – ферментов, адапторов и ингибиторов. Примером адапторного белка, функционирующего как в эндоцитозе, так и в клеточной сигнализации, служит интерсектин 1 (ITSN1). Ранее нами показано, что ITSN1 формирует комплекс с адапторным белком Ruk/CIN85 и убиквитин лигазой Cbl-b, участвующими в негативной регуляции рецепторных тирозинкиназ. Целью данной работы было выявление субклеточной локализации комплексов Ruk/CIN85-ITSN1 по отношению к клатрину и Cbl-b. Методы. Для определения локализации белков клетки аденокарциномы молочной железы человека MCF-7 транзиентно трансфицировали конструкциями, кодирующими ITSN1 и клатрин, и исследовали методами прямого и не прямого иммунофлуоресцентного анализа. Результаты. Показано, что ITSN1 и Ruk/CIN85 частично колокализуются с Cbl-b и клатрином в клетках линии MCF-7. Выводы. Установлено, что комплексы ITSN1 и белка Ruk/CIN85 частично колокализуются с Cbl-b и находятся в клатрин-окаймленных ямках клеток линии MCF-7
Keywords: интерсектин, Ruk/CIN85, Cbl-b, клатрин-окаймленные ямки, иммунофлуоресценция

References

[1] Sengar A., Wang W., Bishay J., Cohen S., Egan S. The EH and SH3 domain Ese proteins regulate endocytosis by linking to dynamin and Eps15 EMBO J 1999 18, N 5:1159–1171.
[2] Predescu S., Predescu D., Knezevic I., Klein I., Malik A. Intersectin- 1s regulates the mitochondrial apoptotic pathway in endothelial cells J. Biol. Chem 2007 282, N 23 P. 17166–17178.
[3] Mohney R., Das M., Bivona T., Hanes R., Adams A., Philips M., O'Bryan J. Intersectin activates Ras but stimulates transcription through an independent pathway involving JNK J. Biol. Chem 2003 278, N 47:47038–47045.
[4] Hussain N., Jenna S., Glogauer M., Quinn C., Wasiak S., Guipponi M., Antonarakis S., Kay B., Stossel T., Lamarche- Vane N., McPherson P. Endocytic protein intersectin-l regulates actin assembly via Cdc42 and N-WASP Nat. Cell Biol 2001 3, N 10:927–932.
[5] Nikolaienko O., Skrypkina I., Tsyba L., Fedyshyn Y., Morderer D., Buchman V., de la Luna S., Drobot L., Rynditch A. Intersectin 1 forms a complex with adaptor protein Ruk/CIN85 in vivo independently of epidermal growth factor stimulation Cell. Signal 2009 21, N 5:753–759.
[6] Tong X., Hussain N., de Heuvel E., Kurakin A., Abi-Jaoude E., Quinn C., Olson M., Marais R., Baranes D., Kay B., McPherson P. The endocytic protein intersectin is a major binding partner for the Ras exchange factor mSos1 in rat brain EMBO J 2000 19, N 6:1263–1271.
[7] Nikolaienko O., Skrypkina I., Dergay O., Matskova L., Tsyba L., Dergay M., Kropyvko S., Vingberg G., Rynditch A. Cbl family proteins – new partners of intersectin 1 Collection of scientific papers «Factors of experimental evolution of organisms». Kyiv: Logos, 2006 Vil. 3:122–127.
[8] Martin N., Mohney R., Dunn S., Das M., Scappini E., O'Bryan J. Intersectin regulates epidermal growth factor receptor endocytosis, ubiquitylation, and signaling Mol. Pharmacol 2006 70, N 5:1643–1653.
[9] Hussain N., Yamabhai M., Ramjaun A., Guyi A., Baranesi D., O'Bryan J., Der C., Kay B., McPherson P. Splice variants of intersectin are components of the endocytic machinery in neurons and nonneuronal cells J. Biol. Chem 1999 274, N 22:15671–15677.
[10] Thomas S., Ritter B., Verbich D., Sanson C., Bourbonniere L., McKinney R., McPherson P. Intersectin regulates dendritic spine development and somatodendritic endocytosis but not synaptic vesicle recycling in hippocampal neurons J. Biol. Chem 2009 284, N 18:12410–12419.
[11] Havrylov S., Ichioka F., Powell K., Borthwick E., Baranska J., Maki M., Buchman V. Adaptor protein Ruk/CIN85 is associated with a subset of COPI-coated membranes of the Golgi complex Traffic 2008 9, N 5:798–812.
[12] Zhang J., Zheng X., Yang X., Liao K. CIN85 associates with endosomal membrane and binds phosphatidic acid Cell Res 2009 19, N 6:733–746.
[13] Sciaky N., Presley J., Smith C., Zaal K., Cole N., Moreira J., Terasaki M., Siggia E., Lippincott-Schwartz J. Golgi tubule traffic and the effects of brefeldin A visualized in living cells J. Cell Biol 1997 139, N 5:1137–1155.
[14] Szymkiewicz I., Kowanetz K., Soubeyran P., Dinarina A., Lipkowitz S., Dikic I. CIN85 participates in Cbl-b-mediated down-regulation of receptor tyrosine kinases J. Biol. Chem 2002 277, N 42:39666–39672.
[15] Kowanetz K., Szymkiewicz I., Haglund K., Kowanetz M., Husnjak K., Taylor J., Soubeyran P., Engstrom U., Ladbury J., Dikic I. Identification of a novel proline-arginine motif involved in CIN85-dependent clustering of Cbl and downregulation of epidermal growth factor receptors J. Biol. Chem 2003 278, N 41:39735–39746.
[16] Dikic I. CIN85/CMS family of adaptor molecules FEBS Lett 2002 529, N 1:110–115.