Biopolym. Cell. 1985; 1(3):147-153.
Генно-инженерная биотехнология
Трансформация клеток дрожжей плазмидной ДНК с использованием хелатирующих агентов. О роли перекисного окисления липидов в индукции компетентности у дрожжей
1Горлов Ю. И., 1Кириллова В. С., 1Жарова Л. Г., 1Лихачева Л. И., 1Кордюм В. А.
  1. Институт молекулярной биологии и генетики АН УССР
    Киев, СССР

Abstract

Обнаружено, что предварительная обработка клеток дрожжей Sacсharomices cerevisiae (штаммы 746 и LL-20) хелатирующими агентами переходных металлов (8-оксихинолин, 1,10-фенантролин) приводит к появлению у них компетентности к трансформации плазмидной ДНК. Изучены факторы, влияющие на эффективность трансформации дрожжей с использованием 8-оксихинолина и двурепликонной плазмиды RВ4. Выход трансформантов при использовании данного метода, как правило, достигал 4·103– 2·104 трансформантов на 10 мкг плазмидной ДНК. Показано, что хелаторы стимулируют перекисное окисление липидов у дрожжей. Присутствие ингибитора окисления липидов – синтетического антиоксиданта ионола в момент обработки клеток 8-оксихинолином – приводит к резкому снижению выхода трансформантов. Полученные данные свидетельствуют о том, что действие хелаторов на способность дрожжей к трансформации опосредовано их влиянием на перекисное окисление мембранных липидов.

References

[1] Beggs JD. Transformation of yeast by a replicating hybrid plasmid. Nature. 1978;275(5676):104-9.
[2] Ito H, Fukuda Y, Murata K, Kimura A. Transformation of intact yeast cells treated with alkali cations. J Bacteriol. 1983;153(1):163-8. MID: 6336730
[3] Berzhinskene IaA, ZiZaite LIu, Baronaite ZA, Grinius LL. Energy supply for transport of plasmid R 100-1 during conjugation of Escherichia coli cells. Biokhimiia. 1980;45(6):1103-12.
[4] Vladimirov Yu A., Archakov AI Lipid peroxidation in biological membranes. Moscow: Nauka, 1972. 252.
[5] Free radical oxidation of lipids in biological membranes. P. Kozlov, V. Danilov, VE Kagan, MV Sitkovsky. Moscow: Izd. University Press, 1972. 88.
[6] Burlakov EB, Alesenko AV, Molochkina EM. bioantioxidants in radiation injury and cancer growth. Moscow: Nauka, 1975. 214.
[7] Biochemistry of lipids and their role in metabolism. Ed. SE Severin. Moscow: Nauka, 1981. 168.
[8] Wills ED. Mechanisms of lipid peroxide formation in tissues. role of metals and haematin proteins in the catalysis of the oxidation unsaturated fatty acids. Biochim Biophys Acta. 1965;98:238-51.
[9] Botstein D, Falco SC, Stewart SE, Brennan M, Scherer S, Stinchcomb DT, Struhl K, Davis RW. Sterile host yeasts (SHY): a eukaryotic system of biological containment for recombinant DNA experiments. Gene. 1979;8(1):17-24.
[10] Storms RK, McNeil JB, Khandekar PS, An G, Parker J, Friesen JD. Chimeric plasmids for cloning of deoxyribonucleic acid sequences in Saccharomyces cerevisiae. J Bacteriol. 1979;140(1):73-82.
[11] Stal'naya I. D. Method for determining diene conjugation of unsaturated higher fatty acids. In the book.: Modern methods in biochemistry. Ed. Orekhovich. M.: Medical, 1977, p. 63-64.
[12] Mintz PI. Kononenko EV Liquid crystals in biological systems. VINITI (Results of Science and Technology. Biofizika 13)., 1982. 150.
[13] van Die I, van Osterhout A, H Bergmans, Hoekstra W. The influence of phase transition of membrane lipids on uptake of plasmid DNA in Escherichia coli transformation. FEMS Microbiology Letters. 1983; 18(1-2):127-130
[14] van Die IM, Bergmans HE, Hoekstra WP. Transformation in Escherichia coli: studies on the role of the heat shock in induction of competence. J Gen Microbiol. 1983;129(3):663-70.