Biopolymers and Cell. 2011; 27(1): 53-58
ЕКСПРЕСІЯ І СЕКРЕЦІЯ РЕКОМБІНАНТНОГО БІЛКА LIF ЛЮДИНИ ГЕНЕТИЧНО МОДИФІКОВАНИМИ КЛІТИНАМИ ССАВЦІВ
Римар С. Ю., Рубан Т. А., Іродов Д. М., Кордюм В. А.
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
вул. Академіка Заболотного, 150, Київ, Україна, 03680
Мета роботи полягала в одержанні експресії гена LIF людини в генетично модифікованих клітинах ссавців і вивченні секреції рекомбінантного білка цими клітинами в культуральне середовище. Методи. Для визначення рекомбінантного LIF в кондиціонованому середовищі, одержаному в результаті культивування клітин, трансфекованих рекомбінантними плазмідами, що містять ген LIF, використовували Вестерн-блот аналіз та імунопреципітацію. Результати. Сконструйовані рекомбінантні плазміди забезпечують експресію і секрецію рекомбінантного LIF людини клітинами трьох ліній (CHO-K1, L-M(TK–)(ins+) і 293Т), трансфекованих цими плазмідами. Ступінь глікозилювання рекомбінантного LIF, продукованого такими клітинами, варіює, при цьому спостерігається секреція повністю глікозильованого LIF (з молекулярною масою близько 68 кДа). Висновки. Кондиціоноване середовище, одержане внаслідок культивування трансфекованих клітин, можна використовувати як джерело LIF людини для культивування клітин, яким потрібен цей ростовий фактор, а також для його виділення в очищеному стані. |
|
Ключові слова: рекомбінантний LIF, експресія, секреція, трансфекція, клітинні лінії. |