Biopolymers and Cell. 2011; 27(4): 310-313
КЛОНИРОВАНИЕ И ЭКСПРЕССИЯ ГЕНА SPAА ЕRYSIPELOTHRIX RHUSIOPATHIAE В ЕSCHERICHIA COLI
Дерябин О. Н., Дерябина Е. Г., 1Гильчук П. В.
ГУ Институт ветеринарной медицины НААН Украины
ул Донецкая, 30, Киев, Украина, 03151
1Институт молекулярной биологии и генетики Национальной академии наук Украины
ул. Академика Заболотного 150, Киев, Украина, 03680
Цель. Клонировать ген SPAА – поверхностный антиген Er. rhusiopathiae – в
плазмидный вектор и экспрессировать белок SpaА в E. coli. Методы. Расчет и синтез
олигонуклеотидных праймеров, полимеразная цепная реакция, клонирование, экспрессия
рекомбинантных белков в E. coli, электрофорез в агарозе и полиакриламидном геле.
Результаты. Полноразмерный и усеченный ген SPAА Er. rhusiopathiae клонирован в
экспрессирующую плазмиду рЕТ24а(+). Экспрессия полного гена не сопровождается наработкой
значительного количества рекомбинантного белка, предположительно, вследствие его
токсичности для клеток E. coli. Элиминация из полноразмерного гена фрагмента, кодирующего
насыщенную пролином область, и домена тандемных повторов, а также получение усеченного
варианта гена приводят к устойчивому синтезу рекомбинантного продукта с ожидаемой
молекулярной массой. Выводы. Получена рекомбинантная плазмида, содержащая фрагмент
гена SPAА Er. rhusiopathiae, что позволяет выделять в препаративних количествах в
E. coli рекомбинантный белок с м. м. 47 кДа.
|
|
| Ключевые слова: Erysipelothrix rhusiopathiae, ген SPAА, рекомбинантный белок |