Biopolymers and Cell. 2011; 27(4): 306-309
НОВАЯ ИЗОФОРМА АДАПТЕРНОГО БЕЛКА ITSN1 ФОРМИРУЕТ ГОМОДИМЕРЫ ПОСРЕДСТВОМ СВОЕГО С-КОНЦЕВОГО ДОМЕНА
Дергай Н. В., Дергай А. В., Цыба Л. А., Новохацкая О. В., Скрипкина И. Я., Рындич А. В.
Институт молекулярной биологии и генетики Национальной академии наук Украины
ул. Академика Заболотного 150, Киев, Украина, 03680
Ранее мы идентифицировали новую изоформу адаптерного эндоцитозного
белка ITSN1, названную ITSN1-22a. Вестерн-блот анализ выявил наличие двух иммунореактивных
полос 120 и 250 кДа, соответствующих ITSN1-22a.
Цель этой работы состояла в изучении возможности формирования димеров изоформой ITSN1-22a.
Методы. Иммунопреципитация и Вестерн-блот анализ использованы для исследования возможности
димеризации изоформы. Идентификацию участка, отвечающего за димеризацию, осуществляли с
помощью сайт-направленного мутагенеза и делеционного анализа. Ингибирование эндоцитоза
индуцировали дефицитом ионов калия. Для митогенной стимуляции клеток применен
эпидермальный фактор роста. Результаты. Нами обнаружено, что сверхэкспрессированная в
клетках НЕК293 изоформа ITSN1-22a формирует димеры. Димеризация изоформы обусловлена ее
специфическим С-концевым доменом. Нами показано, что цистеины С1016 и С1019 вовлечены в
процесс гомодимеризации. Ингибирование клатрин-опосредованного эндоцитоза и митогенная
стимуляция клеток не влияют на формирование димеров изоформой ITSN1-22a. Выводы.
ITSN1-22a – это единственная на сегодня изоформа ITSN1, способная образовывать
гомодимеры посредством дисульфидных связей, что может быть важно для формирования
ITSN1-содержащих белковых комплексов.
|
|
| Ключевые слова: интерсектин 1, изоформа, гомодимер |