Biopolymers and Cell. 2011; 27(4): 273-278
БАКТЕРИАЛЬНАЯ ЭКСПРЕССИЯ И МЕЧЕНИЕ ИЗОТОПАМИ 13С/15N ЦИТОКИНА EMAP II ДЛЯ СТРУКТУРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ МЕТОДОМ ЯМР-СПЕКТРОСКОПИИ
Ложко Д. Н., 1Жуков И. Ю., Корнелюк А. И.
Институт молекулярной биологии и генетики НАН Украины
ул. Академика Заболотного 150, Киев, Украина, 03680
1Институт биохимии и биофизики Польской академии наук
ул Павинского 5а, Варшава, Польша, 02-106
Цель. Получение рекомбинантного цитокина EMAP II в препаративных количествах
с использованием бактериальной экспрессии и его изотопное мечение для исследования
пространственной структуры методами мультимерной ЯМР-спектроскопии. Методы. EMAP II
экспрессирован в клетках Еscherichia соli BL21 (DE3)pLysE на минимальной среде
с мечением
изотопами 13C и 15N, а также очищен методом металл-хелатирующей
хроматографии на
Ni-NTA-агарозе. Для проверки массы и чистоты меченых рекомбинантных белков применен
метод масс-спектрометрии. Получены двухмерные ЯМР-спектры рекомбинантного цитокина EMAP
II в растворе. Результаты. Выделены препараты рекомбинантного белка EMAP II,
меченные изотопами 13C и 15N, которые исследовали методом двухмерной ЯМР-спектроскопии.
Выводы. Дисперсия сигналов ЯМР в спектрах 1H/15N и 13C/15N-HSQC подтверждает наличие компактной трехмерной структуры белка. Изотопно меченные препараты EMAP II сохраняют стабильность на протяжении 5–6 дней, что дает возможность дальнейшего определения пространственной структуры белка в растворе методом ЯМР-спектроскопии.
|
|
| Ключевые слова: цитокин, EMAP II, изотопное мечение, массспектрометрия, ЯМР-спектроскопия, двухмерные спектры |