Biopolymers and Cell 27(3) P 199-205

МОДИФИКАЦИЯ МЕТОДА ХОЛОДНОГО С ПРИМЕНЕНИЕМ ПЭТ ПЛEНОК ДЛЯ ОТБОРА ОБРАЗЦОВ МИКРОБНЫХ ЦЕНОЗОВ В ПОЧВЕ

Мошинец Е. В., 1Коза А., 1Делло Стерпайо П., Кордюм В. А., 1, 2Спайрс Э. Д.

Институт молекулярной биологии и генетики НАН Украины
ул. Ак. Заболотного, 150, Киев, Украина, 03680

1 The SIMBIOS Centre, University of Abertay Dundee
Bell St., Dundee DD1 1HG, Великобритания

2Division of Forensics and Bio Sciences, School of Contemporary Sciences, University of Abertay Dundee
Bell St., Dundee DD1 1HG, Великобритания

Цель данной работы состояла в исследовании возможности использования плeнок, изготовленных из ПЭТ (полиэтилентерефталат), как современной модификации метода стeкол обрастаний Холодного для микроскопического и молекулярно-генетического анализа почвенных сообществ с сохранением их пространственной архитектуры на микроуровне. Такая сохранность деталей пространственного расположения объектов позволила бы глубже изучить их в подобных сложных условиях обитания. Методы. Классические микробиологические методы; анализ прикрепления; измерение поверхностного натяжения; молекулярногенетические методы: экстракция ДНК, ПЦР; конфокальная лазерная сканирующая микроскопия (КЛСМ); микрофокусная рентгеновская компьютерная томография (микроКТ). Результаты. Во-первых, используя модельные почвенные и ризосферные бактерии Pseudomonas fluorescens SBW25 и P. putida KT2440, мы показали, что бактерии способны к прикреплению и откреплению от ПЭТ плeнок, а прекультивирование в условиях отфильтрованной почвенной суспензии улучшает уровень прикрепления. Бактерии, прикреплeнные к плeнкам, сохраняют жизнеспособность и могут формировать полноценную биоплeнку. ПЕТ плeнки, погружeнные в почву, колонизируются микроорганизмами, что наблюдали как с применением КЛСМ, так и методом культивирования извлечeнных из почвы плeнок на агаризованной питательной среде. Во-вторых, мы продемонстрировали, что микроКТ можно использоватьа для недеструктивного наблюдения за сайтами связывания почвенных агрегатов и почвенных пор с поверхностью ПЕТ плeнки, находящейся в почве. Выводы. Применение ПЕТ плeнок оказалось удачной модификацией метода стeкол обрастаний Холодного и может стать полезным для отбора почвенных микробных сообществ, изучения бактериального прикрепления, роста, развития как биоплeнок, так и сообщества. Использование этих плeнок при анализе почвы с помощью микроКТ позволит лучше определять почвенные микроэкониши и природу архитектуры микробных взаимодействий в таких сложных экологических условиях.

Ключевые слова: Pseudomonas, почва, стeкла обрастания, ПЭТ плeнки

 

Summary in English