Biopolymers and cell. 2010; 26 (6): 478 - 485
Функціональна роль С-кінцевого домену лейцил-тРНК синтетази Thermus thermophilus
О. Й. Гудзера, Г. Д. Яремчук, М. А. Тукало
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України, Вул. Академіка Заболотного, 150, Київ, Україна, 03680
Мета. Дослідити роль С-кінцевого домену лейцил-тРНК синтетази T. thermophilus (ЛейРСТТ) у реакціях аміноацилювання та редагування. Методи. Мутант ЛейРСТТ без С-кінцевого домену (ΔС) отримано методом мутагенезу. Кінетичні константи в реакції аміноацилювання ЛейРС та її мутанта ΔС визначали методами ферментативної кінетики стаціонарного стану. Для оцінювання внеску С-кінцевого домену у взаємодію ферменту з тРНКLeu методом флуоресцентного титрування розраховано Кd комплексу тРНК з ЛейРСТТ та її мутантом ΔС. Результати. Показано, що С-кінцевий домен відіграє істотну роль у реакціях аміноацилюванняя і редагування Лей- РСТТ і не є важливим для активності в реакції активації амінокислоти. Визначено також кінетичні параметри в реакції аміноацилювання ЛейРС і ΔС мутанта для тРНКLeu і тРНКTyr, аналіз яких свідчить про те, що С-домен є некритичним для прояву специфічності ферменту у розпізнаванні гомологічної тРНК. У той же час встановлено суттєвий вплив С-кінцевого домену на величину каталітичної константи реакції аміноацилювання. Делеція останнього призводить до зниження kcat у 152 рази. Висновки. С-кінцевий домен ЛейРСТТ еволюційно придбаний для підвищення швидкості каталізу в реакціях аміноацилювання і редагування і не робить значного внеску у забезпечення специфічності ферменту при розпізнаванні тРНК.
Ключові слова: лейцил-тРНК синтетаза, тРНКLeu, редагування.