Biopolymers and Cell 1990; 6(2) P 35-38

ПОДБОР ОПТИМАЛЬНЫХ УСЛОВИЙ ПРОВЕДЕНИЯ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ СИНТЕЗА ДНК ПРИ ИДЕНТИФИКАЦИИ МУТАЦИЙ В 12-м ЭКЗОНЕ ГЕНА ФЕНИЛАЛАНИНГИДРОКСИЛАЗЫ ЧЕЛОВЕКА

М. И. Николенко, С. Б. Арбузова

Донецкий медицинский институт им. М. Горького, медико-генетический центр

Описаны условия проведения реакции амплификации ДНК для определения мутаций в 12-м экзоне гена фенилаланингидроксилазы (ФАГид). Указано на необходимость оптимизации условий реакции. Подчеркивается последовательность составления реакционной смеси, при этом праймеры, фермент и трифосфаты следует добавлять после денатурации ДНК. ДНК можно выделять не только из цельной крови больных фенилкетонурией (ФКУ), но и из сухих пятен крови на фильтровальной бумаге. В результате амплификации образуется фрагмент гена ФАГид длиной 245 пар оснований (п. о.), несущий мутации. Последующая дот-гибридизация с мутантними мечеными зондами позволяет определить гетерозиготное носительство у здоровых членов семей.

 

Summary in English